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你知道細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)染效率低的原因嗎？

轉(zhuǎn)染細(xì)胞效率低下的原因在生物醫(yī)學(xué)研究中，將外源基因?qū)爰?xì)胞以研究其功能或使細(xì)胞展現(xiàn)出新的特性是非常常見的實(shí)驗(yàn)手段。然而，轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率低下一直是科研人員面臨的一大難題。今天小編將探討轉(zhuǎn)染細(xì)胞效率低下的原因，以期為提高轉(zhuǎn)染效率提供有益的思路。1.細(xì)胞類型和狀態(tài)不同的細(xì)胞類型具有不同的轉(zhuǎn)染效率。一些難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如神經(jīng)元和肝細(xì)胞，通常需要更復(fù)雜的轉(zhuǎn)染技術(shù)。此外，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞更容易接受外源基因。如果是貼壁細(xì)胞的話，貼壁率應(yīng)該在70-80%；如...

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RNA的種類與功能介紹

RNA的分類1.信使RNA(mRNA)信使RNA是RNA的一種，主要功能是將DNA上的遺傳信息傳遞到蛋白質(zhì)合成機(jī)器——核糖體上，從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的。信使RNA的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，一般由一條單鏈RNA組成。mRNA的長(zhǎng)度差異較大，哺乳動(dòng)物的mRNA長(zhǎng)度一般在5×102～1×105個(gè)核苷酸，這種長(zhǎng)度的差異使得mRNA能夠攜帶更多的遺傳信息。在細(xì)胞中，mRNA的含量占到了總RNA的1%～5%，雖然mRNA的含量相對(duì)較少，但種類繁多，因?yàn)槿梭w中約有2萬(wàn)多個(gè)基因，每個(gè)基因都會(huì)產(chǎn)生一種mRNA。正...

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脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理與方法

脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。帶正電的陽(yáng)離子脂質(zhì)體，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電的DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。下面讓我們一起來看看脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理與方法吧！脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染操作步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)先規(guī)劃好實(shí)驗(yàn)，一般細(xì)胞轉(zhuǎn)染需要24h-72h，所以要充分了解細(xì)胞生長(zhǎng)速度，計(jì)算所需脂質(zhì)體和DNA...

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實(shí)驗(yàn)中的抗體應(yīng)用問題和解決方案

抗體是一種由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面?？贵w能識(shí)別特定外來物的一個(gè)特征，該外來目標(biāo)被稱為抗原。1.做流式的抗體和免疫組化的抗體是一樣的嗎?不一定能通用。流式是用直接標(biāo)記還是間接標(biāo)記?如果是直接標(biāo)記的話，那這個(gè)抗體一般不是FITC標(biāo)記或者就是TRITC，PE之類的。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標(biāo)記的抗體來直接標(biāo)記，那就可以通用。如果你的免疫組化要用...

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一步法RT-qPCR實(shí)驗(yàn)優(yōu)化小技巧

常見的RT-qPCR流程一般分為RNA提取，逆轉(zhuǎn)錄、熒光定量PCR三個(gè)步驟，當(dāng)有的課題需要對(duì)某物種進(jìn)行多種處理后，檢測(cè)某個(gè)基因的表達(dá)水平，以驗(yàn)證該基因應(yīng)對(duì)不同脅迫壓力的耐受力；或者經(jīng)某種病原菌侵染后，檢測(cè)寄主不同基因的表達(dá)水平，以探究可能涉及的通路及互作機(jī)理等……對(duì)于這幾類樣本數(shù)量較大，但樣本只需要檢測(cè)一次的實(shí)驗(yàn)方案，我們常常推薦一步法RT-qPCR，即逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR配制一管體系，只需一次上機(jī)即可完成表達(dá)量的檢測(cè)。由于將RNA逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR的體系配制合為一步，...

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