NEB T4 DNA連接酶protocol:

1、在微型離心管(冰上)中設(shè)置以下反應(yīng)：

（T4 DNA連接酶應(yīng)最后添加。注意：表中顯示了使用1mol:3mol插入zhi定DNA大小的載體的連接。）

**注意：T4 DNA連接酶緩沖液應(yīng)在室溫下解凍并重懸。

2、通過吸管上下輕輕混合反應(yīng)物，并短暫地進(jìn)行微量離心。

3、對于粘性（粘性）末端，在16°C下孵育過夜或室溫下孵育10分鐘。

4、對于鈍端或單堿基懸突，在16°C下孵育過夜或室溫下孵育2小時（或者，高濃度T4 DNA連接酶可用于10分鐘的連接）。

5、在65°C下加熱滅活10分鐘。

6、在冰上冷卻，將1-5μl的反應(yīng)轉(zhuǎn)化為50μl的感受態(tài)細(xì)胞。

NEB T4 DNA連接酶使用時的注意事項：

1、ATP 是反應(yīng)中必不ke少的輔因子。這與需要 NAD 作為輔因子的 E. coli DNA 連接酶不同。

2、若需稀釋 T4 DNA 連接酶，推薦使用含 50% 甘油的貯存緩沖液（稀釋緩沖液 A，NEB #B8001S）稀釋，然后于 -20℃ 貯存。如稀釋后立即使用，也可以使用 1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液稀釋。

3、連接反應(yīng)可以在添加 1 mM ATP 的四種限制性內(nèi)切酶緩沖液的任何一種或在 T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）緩沖液中進(jìn)行。

4、室溫連接。

有關(guān)更多NEB T4 DNA連接酶的介紹，請聯(lián)系百奧創(chuàng)新客服！

NEB T4 DNA連接酶代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司，成立于2017年，由經(jīng)驗豐富的技術(shù)團隊、商業(yè)團隊及管理團隊組建而成，專注于免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域核心試劑產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售基于“客戶第一"的核心理念，百奧創(chuàng)新在產(chǎn)品自主研發(fā)的同時，也與全球多家生命科學(xué)試劑供應(yīng)商建立良好的合作關(guān)系，向全球10，000+客戶提供200，000+優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。百奧創(chuàng)新將以品質(zhì)樹立品牌，以服務(wù)贏得口碑，致力于成長為重要的生物化學(xué)試劑開發(fā)與成果轉(zhuǎn)化的kai tuo zhe，并成為行業(yè)ling xian的優(yōu)質(zhì)品供應(yīng)商。